Cas9是Rna引導(dǎo)的DNA核酸內(nèi)切酶。該酶與CRISPR（聚集的規(guī)則間隔短回文重復(fù)序列）適應(yīng)性免疫系統(tǒng)相關(guān)聯(lián)各種類型的細(xì)菌，包括化膿性鏈球菌Casg，能夠解開外源DNA（如質(zhì)粒DNA或入侵噬菌體DNA），然后檢查與20pacer互補(bǔ)的位點(diǎn)。指導(dǎo)RNA的區(qū)域。如果DNA底物與指導(dǎo)RNA互補(bǔ)，則Cas9切割入侵的DNA。Cas9蛋白作為基因組工程工具受到了quan世界的關(guān)注。DNA中的雙鏈斷裂導(dǎo)致的DNA斷裂可以使基因失活或通過(guò)非同源末端連接引入異源基因。和同源重組，分別在許多實(shí)驗(yàn)室模型生物中。此外，Cas9幾乎可以切割與其相關(guān)的指導(dǎo)RNA互補(bǔ)的任何序列。在人類細(xì)胞中使用CRISPR/Cas9系統(tǒng)已經(jīng)證明了基因缺失和基因替代。下面讓我們一起來(lái)看看Cas9 ELISA試劑盒(NB-E1372HS)的測(cè)定程序：

1. 向抗Cas9抗體包被的平板中加入100μlCas9未知樣品或標(biāo)準(zhǔn)品。每個(gè)Cas9未知樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和空白品應(yīng)一式兩份進(jìn)行測(cè)定。

2. 在室溫下在軌道振蕩器（200-500 rpm）上孵育1小時(shí)。

3. 每孔用250µL 1X洗滌緩沖液洗滌微孔條3次，每次洗滌之間che底抽吸。最后一次洗滌后，清空孔并在吸水墊或紙巾上輕敲微孔條，以除去多余的1X洗滌緩沖液。

4. 向每個(gè)孔中加入100µL稀釋的生物素化抗Cas9抗體。在室溫下在軌道振蕩器（200-500 rpm）上孵育1小時(shí)。

5. 根據(jù)上述步驟3，清洗帶孔3次。

6. 向每個(gè)孔中加入100μL稀釋的鏈霉親和素酶綴合物。在軌道振蕩器（200-500 rpm）上在室溫下孵育1小時(shí)。

7. 根據(jù)上述步驟3，清洗帶孔3次。立即進(jìn)行下一步。

8. 將基板溶液加熱至室溫。向每個(gè)孔（包括空白孔）中加入100μL底物溶液。在室溫下在軌道振蕩器上孵育。實(shí)際孵育時(shí)間可能在2-30分鐘之間變化。

9. 通過(guò)向每個(gè)孔（包括空白孔）中加入100µL終止溶液來(lái)終止酶反應(yīng)。應(yīng)立即讀取結(jié)果（顏色會(huì)隨著時(shí)間的推移而褪色）。

10. 使用450 nm作為主波長(zhǎng)，在分光光度計(jì)上讀取每個(gè)微孔的吸光度。

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